Vinaora Nivo Slider 3.xVinaora Nivo Slider 3.xVinaora Nivo Slider 3.xVinaora Nivo Slider 3.xVinaora Nivo Slider 3.xVinaora Nivo Slider 3.xVinaora Nivo Slider 3.xVinaora Nivo Slider 3.x

Способы получения гена

Существует три способа получения гена:

  1. выделение его из ДНК;
  2. путем химико-ферментативного синтеза;
  3. воссозданием на основе изолированной матричной РНК с помощью РНК-зависимой ДНК-полимеразы (ревертазы).

Выделение нужного гена из ДНК. Один из первых способов получения гена, который был предложен, — выделение ДНК из подходящего источника при помощи специфических ферментов — эндонуклеаз рестрикции, или рестриктаз. Этот метод обычно применяют в том случае, если структура ДНК, из которой выделяют нужный ген, хорошо известна, как и сайты рестрикции.

В общем виде схема эксперимента выглядит следующим образом. Вначале получают гомогенную ДНК, затем ее обрабатывают комплексом рестриктаз. Рестрикты встраивают в подходящую плазмиду (как правило, из серии pBRдля Е. coli), которую в свою очередь вводят в клетки-реципиенты, и исследуют просинтезированные белки. Отбирают те клетки, которые синтезируют нужный белок, а, следовательно, несут нужный ген. Описанный метод на первый взгляд кажется весьма простым и доступным. Однако у него существует ряд недостатков:

  1. обработка рестриктазой нативной ДНК может привести к расщеплению нужного гена или к отщеплению вместе с ним лишних участков этой кислоты, тогда полученные рестрикты не будут иметь никакой ценности,
  2. в выделенные таким способом гены нельзя встроить какие-то регуляторные элементы, поскольку неизвестна их структура и функциональная активность.

Химико-ферментативный синтез нужного гена. В качестве альтернативы вышеописанному методу был предложен второй метод — химико-ферментативный. Его сущность заключается в следующем. На первом этапе химическим синтезом получают короткие олигонуклеотиды, которые затем соединяют при помощи фермента лигазы. В результате получают нужный ген, не имеющий лишних участков, полностью соответствующий природному гену. Кроме того, в процессе синтеза в его структуру можно встроить необходимые регуляторные элементы, ввести какие-то замены и т. д. Однако описанный метод применим лишь в том случае, когда известна структура нужного гена или хотя бы структура кодируемого им белка. К недостаткам данного способа относится еще и трудоемкость.

Воссоздание нужного гена на основе изолированной матричной РНК с помощью РНК-зависимой ДНК-полимеразы (ревертазы). Это наиболее популярный метод синтеза генов. Матричной РНК обычно много в клетках, специализирующихся на синтезе определенного белка. Она не содержит интронов соответствующих генов, поэтому может транслироваться в бактериальной клетке. Обратная транскриптаза — РНК-зависимая ДНК-полимераза — образует копии ДНК с геномов мРНК.

© 2015-2019 vseobiology.ru | При использовании материалов сайта - прямая ссылка на vseobiology.ru обязательна.

Электронный адрес для связи artemchichkov@gmail.com

^ Наверх