Если мой сайт помог вам в подготовке к экзаменам вы можете отправить ссылку своим друзьям биологам.  Это сделает ресурс лучше!

Vinaora Nivo Slider 3.xVinaora Nivo Slider 3.xVinaora Nivo Slider 3.xVinaora Nivo Slider 3.xVinaora Nivo Slider 3.xVinaora Nivo Slider 3.xVinaora Nivo Slider 3.xVinaora Nivo Slider 3.x

В начале 50-х гг. XX в. было установлено, что типы спаривания клеток бактерий обусловлены генетически и, что генетическая информация переносится из клеток мужского типа в клетки женского типа, или реципиентные клетки. Их способность служить донорами передавалась при конъюгации чаще, чем любой другой генетический признак. Она получила название «F-фактор», или фактор фертильности (плодовитости). Он напоминал внехромосомные генетические элементы, имеющиеся в цитоплазме высших организмов, и в 1952 г. Ледерберг присвоил подобным системам общее название — плазмиды.

Итак, плазмиды — это автономные самореплицирующиеся генетические единицы (ДНК-содержащие), найденные у бактерий, грибов, растений и животных. Возможность их использования как векторов для введения чужеродных генов в бактериальные клетки начиная с 1975 г. послужила толчком для стремительного развития исследований в области генетической инженерии. На основе плазмидных векторов к настоящему времени сконструировано и клонировано большое разнообразие рекомбинантных ДНК, содержащих гены различных организмов — от самых примитивных до человека.

Наибольшее применение в генетической инженерии нашли бактериальные плазмиды, особенно образованные Е. coli. Так, последняя дает:

  • ColEl,
  • ColEl Amp (несет ген устойчивости к ампициллину),
  • pBR322 (несет гены устойчивости к ампициллину и тетрациклину).

Рассмотрим подробнее строение одной из этих плазмид, а именно плазмиды pBR322 которая была сконструирована в лаборатории Бойера.

Строение плазмиды

Эта плазмида несет два селективных маркера, определяющих устойчивость к тетрациклину и ампициллину. Наиболее часто она используется для клонирования Pstl-фрагментов, хотя возможно ее применение для клонирования и других рестриктов.

При конструировании векторов на основе плазмид обычно учитываются три условия:

  1. плазмида должна иметь ограниченное количество участков узнавания одной рестриктазой, под действием которой кольцевая молекула превращается в линейную. По границам данного разрыва происходит встраивание чужеродного сегмента ДНК. Чем больше плазмида содержит уникальных участков узнавания для различных рестриктаз, тем она универсальнее, т. е. допускает встраивать фрагменты, полученные рестриктазами различной специфичности;
  2. вновь сконструированная рекомбинантная кольцевая ДНК должна сохранить репликативные свойства исходной плазмиды;
  3. вектор должен иметь генетический маркер, позволяющий вести отбор рекомбинантных клонов.

В принципе методика клонирования в плазмидных векторах очень проста. ДНК плазмиды расщепляют рестриктирующей эндонуклеазой и соединяют in vitro с чужеродной ДНК. Затем получающимися рекомбинантными плазмидами трансформируют бактерии. Часто используют метод инактивации в результате вставки для тех плазмид, которые содержат несколько маркеров устойчивости к антибиотикам. Очищенную плазмидную ДНК и ту, которая должна быть встроена, расщепляют таким рестриктирующим ферментом, который узнает в плазмиде уникальный сайт, расположенный внутри гена устойчивости, например, к тетрациклину. Проводят лигирование этих двух ДНК в соответствующих концентрациях и лигированной смесью трансформируют, например, чувствительные к ампициллину клетки Е. coli так, что они становятся устойчивыми к этому антибиотику.

Давайте вместе сделаем данный сайт лучше! Поделитесь ссылкой на этот сайт со своими одногрупниками. Это поможет развитию нашего сайта.

2015-2020 © Биология для студентов | При использовании материалов сайта - прямая ссылка на vseobiology.ru обязательна.

^ Наверх