Векторы на основе фага А. Фаг X — умеренный фаг, паразитирующий на клетках Е. coli, содержащий ДНК. Размер последней составляет 45 тыс. пар нуклеотидов, включающих три группы генов и срединную область, которая несет информацию о белке-репрессоре, а также участок для встраивания ДНК фага в ДНК бактерии. По обе стороны от срединной 26 области располагаются:
- предранние гены,
- задержанноранние,
- поздние гены, заканчивающиеся двумя cos-участками.
Функция первых — поддержание лизогенного состояния бактериофага в клетке. Поздние гены синтезируют фаговые белки, лизирующие клетки и способствующие выходу из бактериальной клетки. Непосредственно cos-участки отвечают за упаковку фаговой ДНК в белки. При конструировании векторов на основе фага X чаще всего используют метод замещения. В этом случае вырезают срединный фрагмент при помощи рестриктаз. На его месте пришивается рекомбинантная ДНК размером до 24 ООО пар нуклеотидов, которую потом упаковывают в фаговые белки и используют для трансформации клеток.
Космиды. Фазмиды.
В 1978 г. был описан новый вид векторных молекул, получивших название космиды. Это гибридные векторы, в состав которых входят три компонента:
- участок плазмиды, включающий ген устойчивости к антибиотику и ориджин;
- cos-участок фага X;
- рекомбинантная ДНК.
Наличие в составе космид cos-участка позволяет производить упаковку ДНК в головку фага и использовать механизмы последнего для трансформации клеток. Емкость космидных векторов — от 33 до 49 тыс. пар нуклеотидов. Фазмидами называют гибриды фагов и плазмид, способные развиваться и как первые, и как вторые. Фазмиды создаются на основе фага Р1. В отличие от космид они обладают меньшей емкостью, однако позволяют использовать методы ДНК-анализа, не перенося информацию из фаговых векторов в плазмидные.