Культивирование растений

Для получения культивируемых каллусных клеток фрагменты тканей (первичные экспланты) помещают на искусственную питательную среду в пробирки, колбы или чашки Петри. Это требует полной асептики, так как грибная или бактериальная инфекция ингибируют рост клеток и приводят культуру к гибели. Поэтому эксплант поверхностно стерилизуют (от 1 до 30 мин в зависимости от его типа) растворами, содержащими активный хлор или ртуть (гинохлорит кальция или натрия, сулема, диацид), к которым добавляют детергенты (для лучшего смачивания поверхности экспланта). Стерилизацию можно разделить на три этапа:

  1. предварительная стерилизация исходного растительного материала. Условия обработки варьируют в зависимости от объекта. Хранящиеся органы промывают водопроводной водой, фрагменты стебля, корня или листа также промывают проточной водопроводной водой и помещают в спирт. Предварительная стерилизация семян – более длительная процедура, зависящая от степени их загрязнённости.
  2. собственно стерилизация. Предварительно простерилизованные ткани и органы помещают в стерилизующий раствор. Необходимое условие процесса стерилизации – это обеспечение достаточной степени чистоты объекта, и сохранность его жизнеспособности.
  3. Постстерилизация. Отмывание объекта от стерилизующего раствора порциями дистиллята.

После инкубации в стерилизующем растворе экспланты промывают тремя порциями стерильной воды по 10 мин в каждой. Питательную среду стерилизуют в автоклаве при 70 - 80 кПа в течение 15—30 мин (в зависимости от объема среды) или фильтруют через ультрафильтры. Посуду, инструменты и материалы, необходимые для работы, также стерилизуют в автоклаве в течение 1 ч при 200 кПа, или сухим жаром в стерилизационных шкафах (при 160°С 2 ч или 1 ч при 180 °С). Работу с культурами проводят в боксах микробиологического типа, облучаемых перед работой ультрафиолетом, или в ламинар-боксах, где асептика достигается постоянной подачей стерильного воздуха в рабочий объем камеры.

© 2015-2019 vseobiology.ru | При использовании материалов сайта - прямая ссылка на vseobiology.ru обязательна.

Заказать курсовую

^ Наверх