Vinaora Nivo Slider 3.xVinaora Nivo Slider 3.xVinaora Nivo Slider 3.xVinaora Nivo Slider 3.xVinaora Nivo Slider 3.xVinaora Nivo Slider 3.xVinaora Nivo Slider 3.xVinaora Nivo Slider 3.x

Общее представление об этапах получения, культивирования in vitro протопластов и регенерации из них растений дано на рис.

Регенерация клеток и растений из протопластов

Сразу после того, как отмыты ферменты, протопласты начинают регенерировать клеточную стенку. Отмечается появление целлюлозных микрофибрилл, постепенно организующихся в типичную клеточную оболочку. Через 2-4 дня протопласт может утратить сферическую форму, и произойдет полное восстановление клеточной стенки. В зависимости от происхождения протопластов и культуральных условий может отмечаться отсутствие синтеза клеточной оболочки в течение нескольких недель или месяцев. Одним из факторов культуральной среды, обусловливающим синтез клеточной стенки, является сахароза. В ее отсутствие синтеза клеточной стенки не происходит.

Протопласты, не регенерировавшие клеточную стенку, теряют способность к нормальному митотическому делению и образованию клеточных колоний. Такие протопласты:

  • или не приступают к делению,
  • или в результате их деления формируются многоядерные структуры, так как кариокинез не сопровождается цитокинезом.

Формирование клеточной стенки не всегда является условием, достаточным для перехода клетки к делению. В зависимости от объекта и условий культивирования к последующему делению может приступить от 0,1 до 80 % восстановивших клеточную стенку протопластов. Первые деления могут происходить через 2-10 дней с начала культивирования протопластов. Образовавшиеся клеточные колонии могут стать источником растений регенерантов. Первое сообщение о регенерации растений в культуре протопластов мезофилла табака было опубликовано в 1971 г. японскими исследователями.

Регенерация растений может происходить:

  • либо через эмбриогенез,
  • либо через образование каллуса с индукцией морфогенеза.

Рассмотрим примеры первого пути.

Протопласты из суспензионной культуры моркови на среде с 2,4-Д через 8-10 суток образуют группы клеток, затем на них формируются эмбриоиды, из которых можно получить проростки, и при переносе на среду без 2,4-Д образуются растения.

Изолированные протопласты из клеток корня моркови, помещенные на среду с 1 %-м кокосовым молоком, содержащую НУК или 2,4-Д, формируют группы клеток; перенос их на среду с гидролизатом казеина, кокосовым молоком или кинетином приводит к образованию каллуса (через 4-8 недель) с последующей дифференциацией на нем эмбриоидов.

Можно получить целые растения из протопластов не только через эмбриогенез, но и путем последовательного формирования побегов и корневой системы. Рассмотрим регенерацию растений из протопластов мезофилла листа табака.

После помещения ИП на среду МС, содержащую 3 мг/л НУК и 1 мг/л БАП, через 3 недели образуются колонии; их переносят на среду Сакристан-Мельхерса, где формируется каллус, а спустя 3 недели — дифференцированные побеги, которые помещают в почву для образования растения.

© 2015-2019 vseobiology.ru | При использовании материалов сайта - прямая ссылка на vseobiology.ru обязательна.

Электронный адрес для связи artemchichkov@gmail.com

^ Наверх