Технология сохранения в культуре in vitro генофонда, используемого в селекции, или в виде растущих коллекций (периодически субкультивируемых пробирочных растений, оздоровленных методом культуры меристем) или в виде клеточных и меристемных коллекций, хранящихся после глубокого замораживания в криобанках, в жидком азоте (температура - 196°С). Цель коллекций и банков - обеспечить селекционера в любое время генотипом, несущим искомые признаки, нужные для его работы.

Растущие коллекции видов и сортов, применяют для сохранения генофонда не только растений, размножающихся вегетативно, но и размножаемых семе­нами. Последнее важно для поддержания маркированных изогенных линий, линий с ЦМС, гетерозисных гибридов, уникальных генотипов, свойства которых будут потеряны при половом размножении.

Периодическое субкультивирование трудоемко и удорожает технологию. Период без пересадок (субклонирования) можно удлинить до 6-24 месяцев, поместив коллекции в условия низких положительных температур (1-10°С) при интенсивности освещения 4000-5000 лк. Выбор температуры определяется холодостойкостью вида растения. Так, для депонирования коллекций картофеля использовалась температура 10 °С, яблони – 1 °С. Рост растений можно также задержать:

  • добавлением к питательной среде осмотиков - маннита и сорбита,
  • повышением концентрации сахарозы,
  • внесением в питательную среду веществ, тормозящих рост.
  • снижением атмосферного давления (= 5 11а),
  • гипоксией (90 % азота + 10 % кислорода).

В качестве последних были использованы гидразид малеиновой кислоты, 2,2-метил-гидразид янтарной кислоты, абсцизовая кислота. В последнее время для замедления роста коллекций начали применять такие методы, как снижение атмосферного давления (до 0,04 мм рт. ст.) и гипоксия. Условия гипоксии создают, применяя смесь 90% азота и 10% кислорода. Иногда комбинируют эти два фактора, снижая концентрацию кислорода и одновременно уменьшая атмосферное давление. В результате рост растений хризантем по числу междоузлий снижался в 3 раза в сравнении с контролем за период выращива­ния 6 недель.

Коллекция генотипов in vitro позволяет разместить на 1 м2 площади в камере для культивирования более тысячи пробирок с растениями. Однако культуры клеток in vitro генетически нестабильны: со временем в них накапливаются изменения, которые могут привести к потере уникальных свойств. Такое депонирование не дает гарантий полного отсутствия генетических и биохимических изменений.

© 2015-2019 vseobiology.ru | При использовании материалов сайта - прямая ссылка на vseobiology.ru обязательна.

^ Наверх