Методы цито- и гистохимии используются для изучения химического состава тканей и клеток при сохранении их структуры, а также для определения локализации химических веществ. Например, реакция Фельгена на ДНК или окраска метиловым зеленым-пиронин на нуклеиновые кислоты (метод Браше). В основе реакции Фельгена лежит кислотный гидролиз ДНК на срезе фиксированной ткани, в процессе которого от ДНК отщепляется альдегидная группа, которая и реагирует с реактивом Шиффа (фуксинсернистой кислотой). В итоге ДНК хроматина приобретает яркую красно-фиолетовую окраску. При окраске по методу Браше пиронин связывается с РНК, окрашивает ее в розовый цвет, а метиловый зеленый связывается только с ДНК, окрашивая ее в сине-зеленый цвет. Иммуногистохимия — это метод выявления точной локализации того или иного клеточного или тканевого компонента (антигена) in situ благодаря связыванию его с меченными антителами. Впервые идея определения локализации молекул в тканях с помощью специфических флюорисцентных красителей, связанных с антителами была реализована в 40-е годы двадцатого века. Альберт Кунс использовал флюорисцентные соединения изоцианата для обнаружения пневмококка в печени мыши в 1941 году. В 1958 году Ригс в своей работе использовал флюорисцентный изотиоцианат (FITC) связанный с антителами. Эти работы стали первыми в мире работами по иммунологическому окрашиванию. Однако метод не получил широкого распространения из-за большой сложности получения антител, сложности визуализации и низкой воспроизводимости результатов. Впоследствии иммуноцитохимические методы стали применяться в молекулярной биологии, а с середины 70-х годов, после открытия моноклональных антител, их роль еще более возросла. В 1993 году появились новые флюорисцентные красители, которые многократно увеличили возможности метода, с этого момента иммуноцитохимическое окрашивание стало использоваться повсеместно, как в клинической диагностики, так и в исследовательской работе.

Иммуноцитохимические методы позволяют локализовать и идентифицировать клеточные и тканевые компоненты (антигены), основываясь на их связывании с антителами. Место связывания определяют при помощи меченых антител. Использование такого подхода позволяет детально исследовать функции и химический состав клеток и сопоставлять полученные результаты с известными морфологическими данными, что дает возможность более детального изучения молекулярных механизмов. Применение антител лежит в основе исследований самых разных молекулярных образований:

  • структурных компонентов клетки,
  • клеточных продуктов (гормонов, ферментов, иммуноглобулинов),
  • рецепторов на клеточной поверхности и так далее.

Основные принципы иммуноцитохимического метода В основе иммуноцитохимических исследований лежит реакция ваимодействия антитела и антигена.

Антиген (antigen = antibody-generating — «производитель антител») — это любое чужеродное вещество, которое при попадании в ткани восприимчивого организма вызывает иммунный ответ, в результате которого формируются специфические антитела, которые затем связываются с данным веществом. Антигенами обычно являются высокомолекулярные белки и полисахариды, реже полипептиды, липиды и 4 нуклеиновые кислоты. Та часть молекулы антигена, которая соединяется с антителом, называется эпитопом или антигенной детерминантой. Биологические объекты, которые состоят из множества макромолекул, например, бактерии, содержат большое количество эпитопов, что определяет разнообразие антител, специфичных данному объекту. Антигеном является любая молекула не свойственная для данного организма, например, молекулы бактериальной стенки являются для нашего организма антигеном, белки мышиной крови будут выступать в качестве антигена при введении их кролику, белки плода являются антигенами для организма матери. Таким образом, любая молекула может быть антигеном при введении ее в организм другого животного и на эту молекулу в организме будет формироваться полноценный иммунный ответ с выработкой антител. Антитела, представляют собой γ- глобулиновую белковую фракцию плазмы и называются иммуноглобулинами.

© 2015-2019 vseobiology.ru | При использовании материалов сайта - прямая ссылка на vseobiology.ru обязательна.

Заказать курсовую

^ Наверх